由于井伊直盛膝下并无男丁，因而由井伊直盛的堂弟兼养子井伊直亲继任井伊家第二十三代家督。当年井伊直亲之父井伊直满受今川家家老小野道高的进谗，被今川义元怀疑谋叛并遭杀害，井伊直亲因而逃往信浓地区，之后虽回到远江国并继任家督之位，但在1562年却再次被今川氏真怀疑谋叛，这次则是道高之子道好所为。

    最后井伊直亲遭朝比奈泰朝进攻而身亡。而为后人所乐道的赤鬼井伊直政，就是直亲的长子（井伊直政是历史中的德川家四大天王之一，但要等到明年，这位名将才会出生）。

    前代井伊直盛唯一的女儿次郎法师，原本是预定与养子的井伊直亲成婚的，却由于井伊直亲的出奔信浓地区，这门婚事最后也不了了之。虽然如此，次郎法师却终身未嫁，且在井伊直亲死后，不仅认养了井伊直政，更沿用了井伊家家督的命名。改名“井伊直虎”。一肩担起了井伊家的存亡。（不过女性在习惯上不被算成一代。因此井伊家第二十四代家督仍然被认为是井伊直政。）

    1568年，小野道好专横并强行占领了井伊谷城，导致远江国人的不满并倒戈至德川家一方。1570年，在德川家康协助下，他们终于击败小野道好，道好也因擅进谗言之罪被德川家康处刑。
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